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磷酸鹽緩沖液需要稀釋到多少才可以使用?

更新時間:2025-08-29  |  點擊率:880

磷酸鹽緩沖液(PBS)是否需要稀釋以及稀釋到何種濃度,主要取決于具體實驗需求。以下是不同場景下的稀釋建議及注意事項:

一、是否需要稀釋?

  1. 無需稀釋的場景
    • 細胞實驗:標準PBS(0.01 M,pH 7.4)可直接用于細胞洗滌、重懸或傳代培養。
    • 分子生物學實驗:如Western blot、ELISA中樣本稀釋或洗滌,通常使用標準濃度。
    • 組織學處理:組織切片漂洗、抗原修復后洗滌等,標準濃度即可滿足需求。
  2. 需要稀釋的場景
    • 高鹽敏感實驗:如某些蛋白質透析或酶活性測定,需降低NaCl濃度(如稀釋至0.14 M)。
    • 特殊細胞類型:某些原代細胞(如神經元)對滲透壓敏感,需用低鹽PBS(如0.001 M磷酸鹽+0.137 M NaCl)。
    • 藥物穩定性測試:模擬體內低鹽環境時,可能需稀釋至生理鹽水濃度(0.9% NaCl,約0.15 M)。

二、常見稀釋比例及用途

稀釋比例 目標濃度 典型用途
1:1(原液) 0.01 M磷酸鹽 + 0.137 M NaCl 細胞培養、Western blot、ELISA、免疫組化洗滌
1:10 0.001 M磷酸鹽 + 0.0137 M NaCl 特殊細胞(如神經元)洗滌、低鹽需求實驗
1:100 0.0001 M磷酸鹽 + 0.00137 M NaCl **低鹽環境模擬(如某些酶活性測定)
調整NaCl濃度 0.01 M磷酸鹽 + 0.014 M NaCl 降低滲透壓至生理鹽水水平(0.9% NaCl)

三、稀釋方法

  1. 體積比稀釋
    • 示例:將10 mL標準PBS加入90 mL去離子水,得到1:10稀釋液。
    • 工具:使用移液器或量筒精確量取,避免污染。
  2. 質量體積比稀釋
    • 適用場景:需精確控制NaCl濃度時(如配制0.01 M磷酸鹽 + 0.014 M NaCl)。
    • 計算:根據目標濃度計算所需NaCl質量(如0.014 M × 58.44 g/mol × 1 L = 0.818 g NaCl/L)。
  3. 分步稀釋
    • 步驟:先稀釋磷酸鹽濃度,再調整NaCl濃度(如需同時降低兩者)。

四、稀釋后驗證

  1. pH測量
    • 稀釋可能改變pH,需用pH計重新測定并調節至目標值(如7.4)。
    • 調整方法:滴加濃鹽酸(降低pH)或氫氧化鈉(升高pH)。
  2. 滲透壓檢測
    • 使用滲透壓計驗證稀釋液是否符合實驗要求(如細胞培養需280-320 mOsm/kg)。
  3. 無菌性檢查
    • 若稀釋后用于細胞實驗,需通過濾膜過濾(0.22 μm)或高壓滅菌確保無菌。

五、注意事項

  1. 避免反復凍融
    • 稀釋后的PBS應分裝保存,避免反復解凍導致pH或滲透壓變化。
  2. 兼容性測試
    • *次使用稀釋液時,需進行預實驗驗證其對細胞活性或實驗結果的影響(如MTT實驗檢測細胞毒性)。
  3. 標記與記錄
    • 稀釋液需明確標注濃度、pH、配制日期及滅菌狀態,避免混淆。
  4. 特殊實驗需求
    • 透皮吸收實驗:可能需稀釋至與接收液成分一致(如含4% BSA的PBS)。
    • 蛋白質電泳:需使用無NaCl的磷酸鹽緩沖液(如Tris-Glycine系統)。
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